1. 背景：
目前我國對生活飲用水、水源水、地表水等進行衛(wèi)生學評價，檢測的指標為大腸菌群和大腸埃希氏菌或糞大腸菌群（耐熱大腸菌群），以這些指標作為糞便污染的指示菌。采用的標準檢測方法為膜過濾法和多管發(fā)酵法。但這兩種方法檢測時間相對較長，需48—72小時，需驗證試驗，試驗步驟較為繁瑣，所以不能對水的衛(wèi)生學狀況做出快速評價。因此，采用快速簡便的檢測方法十分必要。酶底物法可以較好的彌補傳統(tǒng)方法的不足。
主要內容：
1、實驗原理
2、儀器設備與試劑耗材
3、實驗步驟
4、討論與分析
2. 原理：
酶底物法采用大腸菌群細菌能產生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養(yǎng)液呈黃色，以及大腸埃希氏菌產生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase）分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β
-D-glucuronide）使培養(yǎng)液在波長366nm紫外光下產生熒光的原理，來判斷水樣中是否含有大腸菌群及大腸埃希氏菌。酶底物法可以選用國標中推薦粉狀培養(yǎng)基來進行簡便的操作；無需確認試驗；酶底物法檢測時間短，只需24小時即可同時定量出水樣中大腸菌群和大腸埃希氏菌的MPN值。
3. 試劑和設備：
3.1 試劑：采用酶底物法市售化的MMO-MUG（Minimum Media ONPG-MUG）培養(yǎng)基。
3.2 耗材：取樣瓶或使用滅菌的玻璃；51孔定量盤或97孔定量盤；
注：51孔定量盤可在無需稀釋的情況下檢測1—200個目標菌/100ml水樣；97孔定量盤可在無需稀釋的情況下檢測1—2419個目標菌/100ml水樣。
3.3 設備：西安捷騁儀器儀表有限公司生產的程控定量封口機；366nm紫外燈；陽性對照物
注：定量程控封口機除了將定量盤進行封口外還對100ml水樣平均分配到51個孔或者是97個孔中。
4. 操作方法：
4.1 定性檢測：
4.1.1 適用范圍：
一般用于檢測飲用水、瓶裝水等；這些水樣的結果是不得檢出。所以只需用定性檢測就可滿足試驗要求。
4.1.2 操作步驟：
1) 將一個試劑倒入裝有100ml水樣的無菌取樣瓶或無菌玻璃瓶中，混勻。
2) 放在36±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24小時；
注：如檢測耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）則需放在44.5℃，培養(yǎng)24小時；如果培養(yǎng)時間超過28小時，則陰性結果則結果有效，如果為陽性結果則結果無效，需重做此水樣。
3) 根據(jù)下面的結果解釋讀取結果
4) 無需確認試驗
4.2 定量檢測
4.2.1 適用范圍：適用于任何一種水體。
4.2.2 操作步驟：
1) 將一個試劑倒入裝有100ml水樣的無菌取樣瓶或無菌玻璃瓶中，混勻。
2) 將瓶內的水樣全部倒入51孔或者是97孔定量盤中，以手撫平定量盤背面以趕除孔穴內氣泡，然后使用定量程控封口機進行封口。
3) 將定量盤放在36±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24小時
注：如檢測耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）則需放在44.5℃，培養(yǎng)24小時；如果培養(yǎng)時間超過28小時，則陰性結果則結果有效，如果為陽性結果則結果無效，需重做此水樣。
4) 根據(jù)下面的結果解釋讀取結果。數(shù)出陽性格子數(shù)后對照MPN表得到結果。
5) 無需確認試驗
5. 測量范圍
5.1 最低檢出限
試劑可以在24小時同時檢測出總大腸菌群和大腸埃希氏菌或耐熱大腸菌群（糞大腸菌群），它可以在100ml水樣中抑制2百萬個雜菌干擾，最低檢出限為每100ml水樣可檢測出1cfu的總大腸菌群，大腸埃希氏菌，耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。
5.2 選用51孔定量盤
在不稀釋的情況下，100ml水樣可檢測200個總大腸菌群，大腸埃希氏菌，耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。
5.3 選用97孔定量盤
在不稀釋的情況下，100ml水樣可檢測2419個總大腸菌群，大腸埃希氏菌，耐熱大腸菌群（糞大腸菌群）。
6 檢測水樣的范圍
飲用水、源水、瓶裝水、中水、二次供水、管網(wǎng)水、廢水、食品水、畜牧用水、醫(yī)療用水
7．實驗過程中需注意的地方
如果樣品有背景顏色，請做一個空白實驗，與結果相比較，如果樣品被稀釋，則在讀取MPN表時乘以相應的稀釋倍數(shù)，只可使用純水，不含緩沖的水，不含
氧化劑的水進行樣品稀釋，如果樣品中含有過多的氯，則在加入Colilert時會顯藍光，此時樣品應被終止檢測。
8．結論
總大腸菌群細菌主要由以下4個菌屬細菌組成：埃希氏菌屬、檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬。這些菌屬可以在人、畜糞便中檢出，有的也可以在營養(yǎng)豐
富的水體中檢出，即非糞便污染的情況下，也有檢出這些細菌的可能性。糞大腸菌群組成與總大腸菌群組成相同，但主要組成是埃希菌屬，在此菌屬中與人類
生活密切相關的僅有一個種，即大腸埃希氏菌；檸檬酸菌屬、克雷伯菌屬和腸桿菌屬所占數(shù)量較少。作為糞便污染的指示菌，大腸埃希氏菌檢出的意義最大，
其次是糞大腸菌群，總大腸菌群的檢出意義略差一些。
酶底物法操作簡便，檢測時間短，可在24小時內同時檢測水中大腸菌群和大腸埃希氏菌的污染狀況且無需確認試驗；減少了傳統(tǒng)方法中人為操作
的誤差，能夠更準確地判斷水樣的微生物污染狀況；作為國家飲用水衛(wèi)生標準的新方法，不但可以用于水樣的例行檢測，更可作為應急突發(fā)事件的必備試劑。
